Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manual (Página 21)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Instrucciones de uso TA9217 ES-CE-Rev_D 08/04/2013
- 30 Test. Se observaron las clasificaciones de máxima calidad con las temperaturas
predeterminadas, por lo que se recomienda utilizar estas temperaturas.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si el tiempo de recuperación
del epítopo inducido por calor (HIER) se aplicaba durante 20 minutos y durante 30 minutos
a 97 °C con la solución Leica BOND ER1, si se comparaba con el protocolo predeterminado
del Leica HER2 FISH System - 30 Test. Se observaron las clasificaciones de máxima calidad
con un tiempo predeterminado de 25 minutos, por lo que se recomienda este tiempo de
incubación.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si el tiempo de recuperación
del epítopo inducido por enzima (EIER) se aplicaba durante 15 minutos y durante 35 minutos
a 37 °C, si se comparaba con el protocolo predeterminado del Leica HER2 FISH System - 30
Test. Se observaron las clasificaciones de máxima calidad con un tiempo predeterminado de
25 minutos, por lo que se recomienda este tiempo de incubación.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si la concentración del
enzima de recuperación del epítopo inducido por el enzima (EIER) se realizaba con
relaciones de concentración de enzima/diluyente de enzima de 1:200 y 1:500 mediante el
protocolo predeterminado del Leica HER2 FISH System - 30 Test protocol. Se observaron las
clasificaciones de máxima calidad con una concentración predeterminada de 1:300 minutos,
por lo que se recomienda esta dilución.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si el tiempo de
desnaturalización se aplicaba durante 5 minutos y durante 15 minutos, si se comparaba
con el protocolo predeterminado del Leica HER2 FISH System - 30 Test. Se observaron las
clasificaciones de máxima calidad con un tiempo predeterminado de 10 minutos, por lo que
se recomienda este tiempo de desnaturalización.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si el tiempo de
desnaturalización se aplicaba durante 9 horas y durante 15 horas, si se comparaba con
el protocolo predeterminado del Leica HER2 FISH System- 30 Test. Se observaron las
clasificaciones de máxima calidad con un tiempo predeterminado de 12 horas, por lo que se
recomienda este tiempo de hibridación.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si el tiempo de lavado de
posthibridación se aplicaba durante 2, 5 y 7 minutos, si se comparaba con el protocolo
predeterminado del Leica HER2 FISH System - 30 Test . Se observaron las clasificaciones de
máxima calidad con un tiempo predeterminado de 4 minutos, por lo que se recomienda este
tiempo de lavado de posthibridación.
• No se observó ninguna diferencia en el estado de amplificación si el Leica HER2 FISH
System - 30 Test se aplicaba a 28 °C y con una humedad relativa del 30% y a 16 °C y con
una humedad relativa del 80%, si se comparaba con el protocolo predeterminado del Leica
HER2 FISH System - 30 Test en condiciones ambientales.
Las operaciones realizadas fuera de los parámetros recomendados para la solidez en el ensayo
de prueba no se han validado. El uso de cualquier otro parámetro de prueba pueden invalidar el
ensayo.
El texto anterior describe las condiciones sometidas a prueba y los resultados del estudio.
Recuerde que Leica no contempla en el ensayo todas las combinaciones posibles de las
condiciones y no recomienda el uso de rangos no predeterminados para todas las condiciones.
El protocolo predeterminado del Leica HER2 FISH Staining Protocol se detalla en la tabla 2.