BINDER CB 60 - Manual (Página 101)

CB (E6) 09/2013 página 101/144
16. Mediciones de referencia
Mediciones de referencia de temperatura, CO
2
y O
2
(CB con regulación de O
2
) pueden realizarse a tra-
vés de un orificio de medición de silicona (N) en la puerta de vidrio interior. Las mediciones de referencia
de la temperatura se realizan básicamente en estado térmicamente estable y con las puertas del aparato
cerradas.
16.1 Medición de referencia de CO
2
Normalmente, los usuarios desean que se realice la medición de referencia entre los intervalos de man-
tenimiento anuales. Para ello, son idóneas principalmente tres posibilidades para medir la concentración
de CO
2
en el interior de la incubadora de CO
2
. Se describen en los capítulos 16.1.1 a 16.1.3.
16.1.1 Medición de CO
2
indirectamente a través del valor de pH del cultivo celular
La determinación de la concentración de CO
2
en el interior de la incubadora de CO
2
puede realizarse
indirectamente a través del valor de pH del medio nutriente. Es un método fácil para comprobar la con-
centración de CO
2
sin un equipo especial. Únicamente es necesario un indicador de pH preciso o un
electrodo de medición de pH que sin embargo forma parte del equipo estándar de los laboratorios de
cultivos celulares.
Este método se basa en el equilibrio ácido-base del sistema de amortiguación en el medio nutriente. Los
medios nutrientes corrientes se amortiguan normalmente con NaHCO
3
. Por medio del valor de pH medi-
do en el medio puede extraerse una conclusión sobre la concentración de CO
2
. El diagrama siguiente
permite leer directamente la relación entre el valor de pH medido en el medio amortiguado con NaHCO
3
y la concentración de CO
2
que puede derivarse de ello, en vol.-%.
Estos sistemas de comprobación no son apropiados para la calibración de los sensores de
BINDER.
Procedimiento recomendado:
•
Incubar una muestra durante medio día en las mismas condiciones que los cultivos celulares. La in-
cubación puede realizarse en una bombona de cultivos celulares o en un tubito Falcon de 50 ml con
tapa abierta.
• Después de la fumigación de gas, extraiga la muestra de la incubadora de CO
2
y mida el valor de pH
en un plazo de 5 minutos, con un electrodo de vidrio.
Durante la medición, en la medida de lo posible, el medio no debe tener ningún contacto superficial
con el entorno, de forma que el CO
2
pueda difundirse poco. Las mediciones que pueden realizarse
después de un tiempo de 5 minutos no pueden garantizar unos resultados de medición suficientes.
Para la medición pueden utilizarse también alternativamente tiras de medición de pH (campo de pH 6-
8, sin desteñir).
4
6
8
10
12
14
16
18
2
3,70 g/l NaHCO
3
2,20 g/l NaHCO
3
0,85 g/l NaHCO
3
6.8 7.0 7.2 7.4 7.6
Valor pH
Vol.% CO 2
0,35 g/l NaHCO
3
1,20 g/l NaHCO
3
Nombre comercial de los medios de cultivo:
DMEM
BME
MEM
Medium 199
Mc Coy
F10
F12
NaHCO
3
[g/l]
3,70
2,20
2,20
2,20
2,20
1,20
1,20
Figura 24: el valor de pH de medios co-
rrientes amortiguados con NaHCO
3
, en
función de la concentración de CO
2
Ejemplo: Cuando se mide un pH de 7,2 en un medio amortiguado con 2,20 g NaHCO
3
por litro, la con-
centración de CO
2
en el entorno del medio es de 8 vol.-%.