Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System - Manual (Página 22)

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Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System Instructions for Use TA9145 ES-CE-Rev_E 18/06/2013
C. Reproducibilidad entre lotes
Para determinar la reproducibilidad entre lotes se fabricaron 3 lotes de Bond Oracle HER2 IHC
Systems conforme a las NCF (Normas de Correcta Fabricación) en 3 ocasiones diferentes y
dichos lotes de evaluaron con 24 cortes de tumor mamario (24 puntos de datos de prueba)
tomados de cuatro bloques tisulares diferentes fijados con formalina e incluidos en parafina
(que representaban las intensidades de tinción HER2 de grado 0, 1+, 2+ y 3+) y tres HER2
Control Slides (12 puntos de datos de control). Los tres ciclos independientes se ejecutaron
en el mismo laboratorio y en tres ocasiones diferentes usando lotes de fabricación diferentes
del Bond Oracle HER2 IHC System. Todos los portaobjetos se tiñeron con el Bond Oracle
HER2 IHC System instalado en un sistema de tinción avanzado y totalmente automatizado
BOND. Los portaobjetos teñidos fueron enmascarados y evaluados de forma aleatoria por
un único observador cualificado para determinar la reproducibilidad entre lotes.
Una evaluación de los portaobjetos (de prueba y de control) indicó que se podían interpretar
36/36 puntos de datos. No se produjo variación en la tinción en ninguno de los 36 puntos
de datos de los tres lotes de fabricación diferentes del Bond Oracle HER2 IHC System. Por
tanto, la tinción con el Bond Oracle HER2 IHC System es consistente en los diferentes lotes
de fabricación.
D. Reproducibilidad entre laboratorios
La prueba de reproducibilidad entre laboratorios del Bond Oracle HER2 IHC System se
evaluó en 3 sitios: Leica Biosystems Newcastle (Sitio A) y dos laboratorios independientes
(Sitios B y C) sobre un total de 192 cortes tomados de un TMA formado por 20 portaobjetos
de tumores mamarios invasivos y 24 HER2 Control Slides. De los 192 cortes de TMA
teñidos, 96 se tiñeron con el HER2 Primary Antibody y 96 con el reactivo de HER2 Negative
Control. Todos los portaobjetos se tiñeron con el Bond Oracle HER2 IHC System instalado
en un sistema de tinción avanzado y totalmente automatizado BOND. Los portaobjetos
se evaluaron en 8 ciclos independientes, ejecutados en cada uno de los 3 sitios diferentes
usando un Bond Oracle HER2 IHC System del mismo lote de fabricación. Los portaobjetos
teñidos fueron enmascarados y evaluados de forma aleatoria en Leica Biosystems,
Newcastle por un único observador experimentado para determinar la reproducibilidad entre
laboratorios.
Una evaluación de los portaobjetos indicó que se podían interpretar 1477/1920 (76,93%)
puntos de datos de prueba. 443 puntos de datos de prueba no pudieron ser interpretados
debido a:
a) Inadecuado rendimiento del portaobjetos de control HER2 en 2/24 ocasiones, provocando
la retirada del estudio de 2 ciclos/160 puntos de datos de prueba. Este evento se produjo
una vez en el Sitio A y una vez en el Sitio B (80 puntos de datos de prueba retirados del
estudio en cada sitio).
b) Desviación del plan de prueba en el Sitio C, en el que 24 portaobjetos en total se
sometieron a contratinción manual con hematoxilina tras la tinción con el Bond Oracle HER2
IHC System. Esto provocó una excesiva contratinción de los portaobjetos de control HER2
y de los puntos de datos de prueba del TMA, provocando la retirada del estudio de 240
puntos de datos.
c) Pérdida de tumor invasivo que provocó la retirada del estudio de 23 puntos de datos de
prueba. Este evento se produjo en 23 ocasiones en el Sitio A y fue el resultado directo de
la pérdida de tejido en el bloque del TMA durante la obtención de los 192 cortes de TMA
consecutivos necesarios para completar esta prueba.
d) Tinción no interpretable debido a un inadecuado lavado por parte del sistema de tinción
avanzado y totalmente automatizado BOND, provocando la retirada del estudio de 20
puntos de datos.