Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System - Manual (Página 14)

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Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System Instructions for Use TA9145 ES-CE-Rev_E 18/06/2013
• Presencia de una ligera/casi imperceptible tinción marrón incompleta de la membrana
celular en la línea celular de control 1+ MDA-MB-175.
• Ausencia de tinción en la línea celular de control 0 MDA-MB-231.
Nota importante: Una característica de la línea celular de control 1+ MDA-MB-175 es su
distintivo patrón de crecimiento en el que las células forman agrupamientos. Dichos
agrupamientos pueden dar lugar a un región luminar continua con borde en cepillo a través
del agrupamiento de células. La tinción del borde en cepillo será mayor que la del resto de
la membrana celular. El patrón correcto de tinción 1+ de la oncoproteína HER2 es aquel que
presenta una tinción incompleta ligera/casi imperceptible de la membrana celular. En esta
línea celular también puede observarse la inmunotinción puntiforme de la región Golgi del
citoplasma.
2. Tejido de control positivo interno – HER2 Primary Antibody
La PRESENCIA de tinción marrón de la membrana debe observarse a un nivel correspondiente
al conocido estado de la oncoproteína HER2 en el control positivo elegido.
3. Componente tisular de control negativo interno – HER2 Positive Control
Debe observarse la AUSENCIA de tinción de la membrana. Un componente tisular de
control negativo confirma la ausencia de reactividad cruzada del sistema de detección
para los componentes celulares/células diana. Si se produce tinción de la membrana en el
componente tisular de control negativo, los resultados obtenidos con la muestra de paciente
deberán considerarse inválidos.
4. Tejido de paciente – teñido usando el HER2 Negative Control
La AUSENCIA de tinción de la membrana verifica el etiquetado específico del antígeno
diana por parte del anticuerpo primario. La presencia de cualquier otra tinción marrón en el
citoplasma de la muestra tratada con el HER2 Negative Control, como de tejido conectivo,
leucocitos, eritrocitos o tejido necrótico, debe considerarse como una tinción inespecífica de
fondo y debe ser tenida en cuenta.
5. Tejido de paciente – teñido usando el HER2 Primary Antibody
Los niveles de expresión de la oncoproteína HER2 se determinan mediante los criterios
definidos en la Tabla 4 y en la Bond Oracle HER2 IHC System Interpretation Guide.
Limitaciones
A. Limitaciones generales
La inmunohistoquímica es una técnica multipaso de laboratorio que se emplea como ayuda
en la interpretación y determinación de las características histopatológicas. Se trata de una
técnica que requiere una formación especializada en todos los aspectos del procedimiento
(incluyendo la selección de los adecuados reactivos, tejidos, fijación, procesamiento y
preparación de portaobjetos IHC) y de la interpretación.
La tinción inmunohistoquímica de tejidos varía en función de la manipulación, la fijación
y el procesamiento del tejido antes de su tinción. Una inapropiada fijación, congelación,
descongelación, lavado, secado, calentamiento, corte o la contaminación con otros tejidos
o fluidos puede generar artefactos, captura de anticuerpos o resultados de falsos negativos.
Los resultados inconsistentes pueden deberse a variaciones en los métodos de fijación
e inclusión o a irregularidades inherentes del tejido (15). Una contratinción excesiva o
incompleta puede influir negativamente en la correcta interpretación de los resultados.
La tinción inespecífica, si aparece, suele tener un aspecto difuso. La tinción esporádica
del tejido conectivo también puede observarse en cortes de tejidos que hayan sido
excesivamente fijados con formalina. Utilice células intactas para la interpretación de los
resultados de tinción, ya que las células necróticas o degeneradas suele teñirse de forma
inespecífica (16). Pueden producirse resultados de falsos positivos debido a la unión no