Hoefer PR625 Immunoblot - Manual (Página 12)

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Apéndice A: Notas técnicas
Nota 1: El bloqueo de la membrana
Membranas siempre deben ser bloqueadas antes
de montar en el ImmunoBlot. Por favor, siga las
instrucciones de bloqueo proporcionado en el kit
de detección de Western Blot.
En general, 5% sin grasa de la leche seca o 5%
de BSA se utilizan como agentes bloqueantes.
El bloqueo con detergentes Tween-20 u otro por
sí solas no se recomienda ya que puede causar
la lenta difusión lateral de proteínas a través de
la membrana de nitrocelulosa. Se recomienda
realizar el paso inicial de bloqueo en una solu-
ción que contiene proteínas (tales como 5% de
BSA) sin detergente. Evitar lavados extensos con
soluciones que no contienen la proteína antes de
montar la membrana en la inmunotransferencia.
En muchos casos, el bloqueo satisfactorios
pueden ser alcanzados por incubación con
PBS/10% ternero recién nacido serum/0.1%
de Tween-20 para un mínimo de una hora a
temperatura ambiente. Sin embargo, los agentes
de bloqueo difieren en su eficacia dependiendo
de las circunstancias. Para borrones de lisados
de células enteras, bloqueando con suero al 50%
a 100 puede ser muy eficaz en la reducción de la
unión no específica.