Hoefer PR625 Immunoblot - Manual (Página 10)

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Fugas - solución
de anticuerpos
se ha trasladado
a los canales
adyacentes. Las áreas secas de la
membrana para actuar
como mechas fluido de las
zonas adyacentes. Siempre pre-mojado de la membrana antes de
montar en la unidad. Llenar cada canal, que cubre la
membrana con tampón.
Membrana no cubren toda
la longitud del canal. Asegurarse de que la membrana se corta al tamaño
apropiado.
El líquido en los canales
sobrecargados se derramó
cuando la unidad fue
sacudida provocando la
contaminación de los
canales adyacentes. No llene en exceso canales.
Vuelva a utilizar las almo-
hadillas de sellado no se
ha sellado correctamente. No vuelva a usar almohadillas de sellado, ya que
comprime durante el uso.
Bandeja de incubación. Considere la posibilidad de incubación de la mancha
con el anticuerpo secundario en el ImmunoBlot en
lugar de incubación de la bandeja. (Véase el Apéndice
A:. Nota 6.)
Membrana es despojado
de bloqueo proteína. Por favor, tenga cuidado de no quitar la mancha de
bloquear la proteína, mientras que el lavado antes de
la adición de anticuerpos primarios. Por favor, siga las
instrucciones de su kit de detección de Western Blot.
Un protocolo de la muestra se da en el Apéndice B.
Canales sin lavar
contenía anticuerpos que
contaminó el experimento. Limpie la unidad después de cada uso. Para consejos
de limpieza, consulte la sección Limpieza del
ImmunoBlot, en la página 7.
Sensibilidad
baja Cuando baja afinidad
o anticuerpos bajos de
titulación se utilizan a
alta dilución (1:100.000
o mayor), una cierta
disminución en la inten-
sidad de señal puede ser
observada. Los anticuer-
pos pueden agotarse en
el pequeño volumen del
canal de ImmunoBlot. Aumentar la concentración de anticuerpos doble 2-5.
Aumentar el volumen de solución de anticuerpos por
canal. Para ello, inserte el estándar 200 µl puntas
de pipeta de plástico en los puertos de entrada tanto
para cada canal. Estos servirán como depósitos para
volúmenes de muestra grandes que el volumen de la
propia canal, mientras que la incubación en el agitador.
Inyectar la muestra de anticuerpos con una punta que
se queda en la puerta de entrada y se convierte en un
depósito.
Realice las incubaciones de secundaria de anticuerpos
en una bandeja. (Véase el Apéndice A, la nota 6.)
Solución de problemas
problema causas posibles recomendaciones