Eppendorf Multiporator - Manual (Página 16)

185
4.7.2 Tampones para la electroporación de células eucariotas
Con el fin de obtener unos resultados de transfección óptimos deben utili-
zarse los tampones de electroporación originales de Eppendorf, con baja
conductibilidad eléctrica. Estos tampones de electroporación (hipoosmo-
lar e isoosmolar) han sido comprobados tanto en lo que se refiere a su
esterilidad como a la ausencia de micoplasmas y endotoxinas.
Gracias a la utilización de estos sistemas de tampón, durante la electro-
poración fluye considerablemente menos corriente, de forma que no se
produce ningún deterioro celular digno de mención. Al mismo tiempo,
gracias al empleo de los correspondientes medios de tamponado, se
logra que los "poros" inducidos eléctricamente sean mucho más grandes
que en el caso de las aplicaciones de impulsos en soluciones conducto-
ras.
Lo ideal sería realizar la electroporación en un tampón hipoosmolar.
Mediante el sistema de tampón hipoosmolar las células absorben agua
poco antes del impulso, con lo cual se hinchan. Debido a diversos efec-
tos, como por ejemplo la disminución de la tensión de ruptura, este
proceso provoca una permeabilización más sencilla de la membrana de
plasma. Con ello se pueden aumentar considerablemente los rendimien-
tos en comparación con los obtenidos bajo condiciones isoosmolares.
En el caso de células que reaccionan con sensibilidad a las condiciones
puramente hipoosmolares, se puede ajustar la osmolaridad necesaria
añadiendo poco a poco el tampón de electroporación isoosmolar.
El tampón de electroporación de Eppendorf debería utilizarse para la
electroporación de células eucariotas (con excepción de las levaduras, de
algunos microorganismos y de plantas). Para la electroporación de bacte-
rias, levaduras y otros microorganismos pueden emplearse medios de
electroporación con menor conductibilidad. En el sitio web de Eppendorf
www.eppendorf.com se pueden consultar protocolos de aplicación
detallados.
4 Descripción del aparato
Multiporator_Text_sp.fm Seite 185 Freitag, 9. Juni 2006 8:13 08