Eppendorf Eporator - Manual (Página 25)

Solución de problemas
Eppendorf Eporator®
Español (ES)
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6 Solución de problemas
6.1 Errores generales
Existen muchos factores que pueden contribuir a que la eficiencia de transformación sea
muy reducida:
• La tensión ajustada: para cada microorganismo existen parámetros de tensión
específicos. Durante la electroporación mueren algunas células. Si la intensidad de
campo es demasiado alta o baja, se obtiene una eficiencia de transformación reducida.
Los valores de sobrevivencia varían entre el 20 y el 80 % del número de células
utilizadas. La electroporación de E. coli requiere un impulso de unos 5 ms y una
intensidad de campo entre 12 kV/cm y 19 kV/cm. Para la optimización del manejo debe
comprobar la eficiencia de transformación con diferentes tensiones de red.
En la página web de Eppendorf www.eppendorf.com se encuentran protocolos de
aplicación para la electroporación de un gran número de cepas de bacterias y
levaduras.
• Las células: las células, por lo general, son transformadas de la manera más eficiente
cuando se encuentran en una fase log temprana a mediana. Diferentes condiciones de
cultivo pueden mejorar la eficiencia de transformación (ver Cultivo y depuración de
células en pág. 17).
Si mueren demasiadas células, se tienen que optimizar las condiciones de la
electroporación para la cepa y analizar la preparación de ADN y el tratamiento de las
células respecto a la existencia de sustancias tóxicas u orgánicas (ver Preparación de
ADN en pág. 16).
Inmediatamente después de la electroporación, usted tiene que transferir las células
(especialmente E. coli) a un medio rico para obtener buenos resultados. Tan sólo un
pequeño retardo de esta medida ya puede resultar en una eficiencia de transformación
considerablemente inferior (ver Regeneración de las células en pág. 20).
• El ADN: usted debería controlar la cantidad y calidad del ADN utilizado antes de la
electroporación. Un ADN mal concentrado o mal degradado resulta en una eficiencia
de transformación reducida.
Antes del proceso de preparación, usted tiene que eliminar todas las sales u otros
componentes del preparado de ADN que pudieran tener un efecto tóxico sobre las
células.
Usted debería transferir el preparado de ADN a las células como mucho un minuto
antes de la electroporación. En la preparación de células, las DNasa pueden debilitar el
ADN y con ello llevar a una eficiencia de transformación menor (ver Preparación de
ADN en pбg. 16).