Eppendorf Eporator - Manual (Página 20)

Manejo
Eppendorf Eporator®
Español (ES)
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5.3.3 Electroporar
5.4 Regeneración de las células
Ejemplo para la bacteria E. coli:
1. Inmediatamente después de la electroporación echar aprox. 1 mL de medio fresco (sin
sustancias químicas de selección) sobre las células. Lo más adecuado para ello es un
medio enriquecido, p. ej. el medio SOC en el caso de E. coli.
2. Resuspender las células cuidadosamente y vertirlas en un nuevo recipiente.
3. Incubar las células a una temperatura de crecimiento óptima (p. ej. 37 °C para E. coli)
durante una hora agitándolas ligeramente (p. ej. con el Thermomixer comfort de
Eppendorf).
5.5 Determinación de la eficiencia de transformación
Después de la fase de regeneración debería preparar cultivos con estas células sobre una
placa añadiendo un medio de selección.
Para determinar la eficiencia, debe extender diferentes concentraciones de células y, en
base a ello, calcular el número de transformantes/μg DNA.
1. Ajustar una tensión entre 200 V y 2 500 V con ayuda de las teclas de flecha.
Después de encender el equipo siempre aparece la tensión ajustada la última
vez. Con las teclas de programa es posible almacenar y llamar las tensiones
utilizadas con mayor frecuencia (ver Programas en pág. 21).
2. Pulsar la tecla Start para iniciar el proceso de electroporación.
• Durante el proceso de carga aparece Charge en la pantalla así como una
barra de progreso.
• Después de la descarga se escucha un tono de advertencia.
• Después de la electroporación aparece en la pantalla la tensión real (act), el
tiempo de descarga de la electroporación realizada y un símbolo de tensión.
3. Extraer el soporte de cubetas del equipo.
A continuación desaparecen tanto el símbolo de cubeta como el símbolo de
tensión.
4. Sacar la cubeta de electroporación del soporte y verter la muestra
cuidadosamente en el respectivo medio sin que se produzcan burbujas.
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