Eppendorf Eporator - Manual (Página 16)

Manejo
Eppendorf Eporator®
Español (ES)
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Abb. 5-2:Indicador
Imag. 5-2: Indicador
5.2 Recomendaciones para la preparación de las muestras
El éxito de la electroporación no sólo depende del aparato, sino también de una serie de
factores adicionales:
• Calidad y concentración del ADN que se va a incorporar
• Calidad y concentración de las células
• Medio de resuspensión del ADN y de las células
5.2.1 Preparación de ADN
• Calidad del ADN: para alcanzar una alta eficiencia de transformación, la solución de
ADN debería ser pura y estar libre de sales (p. ej. mediante procesos de depuración).
• Tampón: ADN disuelto en tampón TE es aceptable, siempre y cuando usted disuelve
este ADN en una cantidad de células electrocompetentes diez veces mayor.
• Concentración de sal: el ADN proveniente de reacciones enzimáticas (p.ej. ligación)
puede ser utilizado directamente para la electroporación si la concentración de sal es
inferior a 5 M. Si la fuerza iónica de la mezcla de reacción es demasiado elevada, ésta
se puede reducir mediante dilución o mediante precipitación con etanol. Tras una
precipitación con etanol, el ADN se puede resuspender en agua desmineralizada
estéril o en un tampón TE.
• Incubación: no incube el ADN durante demasiado tiempo con la suspensión de células
antes de la electroporación. Por lo general debería transferir el ADN a las células un
minuto antes de la electroporación e incubar la solución a una temperatura de 0 °C.
Tiempos de incubación largos pueden provocar la descomposición del ADN a causa de
las DNasas contenidas en la suspensión de células.
1 Valor de tensión real (en V)
2 Tiempo de descarga real (en ms)
3 Símbolo de tensión
El símbolo de tensión aparece
después de la electroporación y
desaparece después de retirar la unidad
enchufable de la cubeta.
4 Símbolo de cubeta
El símbolo de cubeta aparece después
de haber insertado una cubeta.
5 Tensión ajustada (en V)
1 2
3 4 5