Iris Sample Processing StatSpin® CytoFuge 12 Versatile Cytocentrifuge System - Manual (Página 11)

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Sección
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Requisitos y preparación de la muestra
Descripción general
La concentración aproximada de células de la muestra debe determinarse con anterioridad a la
preparación del portaobjetos en la Cytofuge 12. Las muestras que contienen una concentración celular
superior a la óptima darán como resultado portaobjetos con las células demasiado apretadas o
amontonadas. Las muestras que tengan una concentración celular demasiado baja darán como resultado
portaobjetos en los que será más difícil hallar, contar o examinar las células. A continuación se ofrece una
guía general para la concentración de muestras basada en un diámetro celular medio de 10
μm:
Concentración de la muestra Recomendación
500 - 1.500 células/µl* Usar la muestra tal cual
< 500 células/µL Preconcentrar la muestra
> 1500 células/µL Diluir la muestra
En muestras con una población celular baja conocida (p. ej., LCR), 50-100 células/μl producirán resultados
aceptables.
PRECAUCIÓN – Siga las precauciones universales con todas las muestras biológicas,
independientemente de que se conozca o no si una muestra contiene algún agente infeccioso. No es
suficiente confiar únicamente en los biosellados como salvaguarda contra la contaminación
producida por patógenos. Cargue y descargue siempre el rotor bajo una campana de seguridad
biológica (consulte las referencias).
Volúmenes de la muestra
Utilice las siguientes guías para el volumen de las muestras en cada uno de los concentradores de la
Cytofuge:
Valores de volumen
máximos Valores óptimos de
volumen
Concentrador de filtro De 50 a 300 µl De 100 a 300 µl
Concentrador de células de un pocillo De 300 a 1.600 µl De 400 a 800 µl
Concentrador de células de tres pocillos De 50 a 400 µl De 100 a 200 µl
Preconcentración
Para obtener los mejores resultados, las muestras de bajo contenido celular deberán concentrarse
previamente. Por ejemplo, si la muestra original contiene unas 100 células/
μl, al concentrarla 10 veces
obtendremos 1.000 células/μl, que es el valor recomendado para la Cytofuge.
Para preconcentrar una muestra,
1. Transfiera 10 ml de muestra a un tubo cónico de centrifuga de polipropileno.
2. Centrifugue la muestra a 1.000-1.500 g durante 10-15 minutos en una centrífuga convencional.
3. Decante 9 ml del sobrenadante libre de células.
4. Resuspenda el botón celular y el sobrenadante restante en un vórtex o por agitación del tubo.
5. Pipetee un volumen adecuado de la muestra concentrada sobre los concentradores de Cytofuge.
Dilución
Para obtener mejores resultados, diluya las muestras que tengan una densidad celular extremadamente
alta. En la mayoría de aplicaciones, se puede utilizar suero salino tamponado o un medio de cultivo tisular
estándar (p. ej., solución salina tamponada de Geys) como diluyente. Si se añaden una o dos gotas de
albúmina sérica bobina (BSA), se facilita la adherencia de las células al portaobjetos.