Hoefer SE245 - Manual (Página 7)

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Verter el gel
1
Preparar la cantidad necesaria de solución de
monómero. Purgar y añadir el iniciador y el cataliza-
dor justo antes de verter el gel. Utilice una pipeta
para entregar la solución en una esquina de la placa,
teniendo cuidado de no introducir burbujas de aire.
Véase más abajo para el nivel de la solución apro-
piada de acuerdo con la aplicación.
No gel de apilamiento
Solución de llenado hasta justo debajo de la parte
superior de la placa dentada. Si las bolsas de aire
forman, retire con una pipeta o una jeringa. Introducir
un peine (con un ligero ángulo) en cada sándwich,
teniendo cuidado de no atrapar burbujas de aire
debajo de los dientes.
Gel de apilamiento
Completa solución a 3 cm por debajo de la parte
superior de la placa de vidrio rectangular. Esta altura
permite 1 cm de gel de apilamiento por debajo de
los pozos. Verter el gel y aplicar una superposición.
Después el gel se polimeriza, preparar el gel de apila-
miento, como se describe a continuación.
2-D electroforesis
Completa solución a aproximadamente 1,5 cm por
debajo de la parte superior de la placa de vidrio
rectangular y aplicar una superposición. Esta altura
permite 4-5 mm de espacio para la tira IPG y un sello
de agarosa.
2
Superponer cada gel con una delgada capa de agua
saturada de n-butanol, agua o tampón de gel diluido
para minimizar la exposición de la superficie superior
de la solución de gel al oxígeno. Entregar la solución
de superposición lentamente de una jeringa de vidrio
equipado con una aguja de calibre 22. Aplicar la solu-
ción cerca del espaciador y permitir que fluya a través
de la superficie sin ayuda.
3
Permitir que el gel se polimeriza durante un mínimo
de una hora.
¡Atención! La acrilamida es
una neurotoxina. Siempre use
guantes y observar todos los
procedimientos de seguridad en
el laboratorio.