Iris Sample Processing StatSpin® CytoFuge 2 Compact Cytocentrifuge System - Manual (Página 8)

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Sección
3
Requisitos y Preparación de la Muestra
Visión General
La concentración aproximada de células de la muestra debe determinarse con anterioridad a la preparación
del portaobjetos en la Cytofuge
® 2. Las muestras que contienen una concentración celular superior a la
óptima darán como resultado portas con las células demasiado apretadas o amontonadas. Las muestras que
tengan una concentración celular demasiado baja darán como resultado portas en los que será más difícil
hallar, contar o examinar las células. A continuación se ofrece una guía general para la concentración de
muestras basada en un diámetro celular medio de 10 µm:
Concentración de la muestra Recomendación
500 - 1.500 células/µl* Use el volumen de muestra óptimo
Menos de 500 células /µl Preconcentrar la muestra
Más de 1.500 células /µl Diluir la muestra
* En muestras con una población celular baja conocida (p. ej., LCR), 50-100 células/µl producirán resultados
aceptables.
PRECAUCIÓN – Con todas las muestras deberán observarse las precauciones universales,
independientemente de que se conozca o no si una determinada muestra contiene algún agente
infeccioso. (Consulte las referencias)
Volúmenes de la Muestra
Utilice las siguientes guías para el volumen de las muestras en cada uno de los concentradores de la
Cytofuge
® 2:
Valores de volumen máximos Valores óptimos de volumen
Concentrador de filtro 50 a 500 µl 100 a 400 µl
Concentrador celular de un pocillo 300 a 1.600 µl 400 a 800 µl
Concentrador celular de tres pocillos 50 a 400 µl 100 a 200 µl
Preconcentración
Para obtener los mejores resultados, las muestras de bajo contenido celular deberán concentrarse
previamente. Por ejemplo, si la muestra original contiene unas 100 células/µl, al concentrarla 10 veces
obtendremos 1.000 células/µl, que es el valor recomendado para la Cytofuge
® 2.
Para preconcentrar una muestra,
1. Transfiera 10 ml de muestra a un tubo cónico de centrifuga de polipropileno.
2. Centrifugue la muestra a 1.000-1.500 g durante 10-15 minutos en una centrífuga convencional.
3. Decante 9 ml del sobrenadante libre de células.
4. Resuspenda el botón celular y el sobrenadante restante en un vórtex o por agitación del tubo.
5. Pipetee un volumen adecuado de la muestra concentrada sobre los concentradores Cytofuge.
Dilución
Para obtener mejores resultados, diluya las muestras que tengan una densidad celular extremadamente alta.
En la mayoría de aplicaciones, se puede utilizar suero salino tamponado o un medio de cultivo tisular
estándar (p. ej., solución salina tamponada de Geys) como diluyente, junto con una o dos gotas de albúmina
sérica bovina (BSA), que facilita la adherencia de las células al portaobjetos.